CRISPR/Cas9基因靶向修饰技术培训

理论讲解：
一、基因编辑技术简介
1.ZFN 2.TALEN 3.CRISPR
二、CRISPR/Cas9基因编辑技术
1.guide RNA序列设计
2.靶基因序列查找
3.sgRNA在线设计、特异性分析和效率验证
4.不同物种sgRNA设计
实验操作：
一、CRISPR/Cas9基因表达载体克隆构建
1.sgRNA设计合成
2.敲除载体选择及线性化
3.sgRNA连接，转化等
理论讲解：
一、CRISPR/Cas9转染策略
1.生物转染 2.物理转染 3.化学转染 4.筛选策略选择
二、脂质体转染，电转，病毒转导，显微注射等）
三、Crispr/Cas9转染策略（植物，动物，原核生物）
四、CRISPR/Cas9病毒系统选择
实验操作：
CRISPR/Cas9敲除质粒转染靶细胞
理论讲解：
一、CRISPR技术应用解析
1.基因敲除2.基因敲入3.CRISPR在转录调控中的应用4.CRISPR靶基因标记定位5.基因敲除小鼠模型构建策略
二、CRISPR案例解析
1.基因敲除小鼠模型构建2.植物基因敲除应用3.细菌，真菌等基因敲除应用
三、Cripr基因脱靶分析及解决方案
四、Crispr/Cas9与siRNA、shRNA
实验操作：
1.CRISPR/Cas9转染后靶DNA检测
2.靶基因修饰位点扩增及鉴定
理论讲解：
一、单碱基基因编辑技术
1.HF2-BE2 2.BE3系统 3.ABE系统。
二、CRISPR-Cpf1系统介绍
三、CRISPR-C2c2系统介绍
四、多靶点sgRNA载体构建策略
五、Crispr/Cas9系统在肿瘤和遗传病治疗中应用解析
实验操作：
1.CRISPR基因敲除效果检测